美国Biostone多物种布鲁氏菌抗体检测试剂盒cELISA 480
美国Biostone多物种布鲁氏菌抗体检测试剂盒(cELISA)
AsurDxTM Brucella Multispecies Antibody cELISA Test Kit
一、概述
试剂盒用于检测猪牛羊血清和牛奶中流产型布氏杆菌，马耳他布鲁氏菌，绵羊附睾种布鲁氏菌和猪种布鲁氏菌的抗体。试剂盒原理是基于cELISA方法，酶标板上已经包被纯化的布鲁氏菌抗原，样品和酶标抗体加入后，如果样品含有布鲁氏菌抗体，能与板上包被抗原特异性结合形成抗原抗体复合物，并阻断的酶标抗体与板上包被抗原结合。能结合在板上的酶标抗体的酶再催化底物显色，显色深度与样品中的抗体含量成反比关系。
二、试剂盒规格及组分
试剂盒组分 10043-02 10043-05 储存温度
抗原包被板 Brucella antigen-Coated Plate 2*96 5*96 4°C
阳性对照（红盖） Brucella Positive Control 1.8mL 2*1.8mL 4°C
阴性对照（白盖）Brucella Negative Control 1.8mL 2*1.8mL 4°C
酶标抗体Anti-Brucella Antibody-HRP Conjugate 1瓶 2瓶 4°C
10X稀释液10X Diluent Solution 12mL 28mL 4°C
20X洗板液 20X Wash Solution 56mL 120mL 4°C
TMB底物 TMB Substrate 24mL 58mL 4°C
终止液 Stop Solution 24mL 58mL 4°C
备注：如果试剂盒超过一个月不使用建议阴阳性对照和酶标抗体在-20°C储存。
三、试剂以及样品制备
1X稀释液：用9体积的蒸馏水稀释1体积的10X稀释液，得到1X稀释液。
1X洗板液：用19体积的蒸馏水稀释1体积的20X洗板液，得到1X洗板液。
酶标物（冻干粉）：先加160ul 1X的稀释液溶解为100X的浓缩液，然后再用1X的稀释液按照检测用量稀释100倍后使用，例如60ul 100x的浓缩液：5940ul 1x的稀释液混匀后足够1板试剂盒的用量。备注：复溶后的100x酶标物保存于2-8°C的有效期为三个月，保存于-20°C的有效期为一年。
小反刍动物血清（山羊，绵羊）预稀释：在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释5倍，例如将40uL的血清加入到160uL的1X稀释液中混匀，备用。
牛或者猪血清预稀释：在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释10倍，例如将20uL的血清加入到180uL的1X稀释液中混匀，备用。
牛奶样品：在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释2倍，例如将100uL的牛奶加入到100uL的1X稀释液中混匀，备用。
四、实验操作
试剂 每孔用量
样品/对照 50uL
酶标抗体 50uL
1X洗板液 2mL
底物 100uL
终止液 100uL
1. 实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出回复室温；
2. 设置好对照及样品在抗原包被板的位置；
3. 加入50uL的阳性对照到抗原包被板两个孔中（阳性对照使用前先振荡混匀）；
4. 加入50uL的阴性对照到抗原包被板的另外两个孔中；（强烈建议将阴性和阳性对照血清分隔加入，例如左上方加阳性对照，右下方加阴性对照）
5. 其他孔各加入50uL预稀释的血清样品或者牛奶样品.
6. 每孔加入50uL酶标抗体，轻微振荡1分钟；
7. 封板，室温（20-25°C）下孵育60分钟；（注意避免阳光直射和空气进入板中）
8. 弃去板中的液体；
9. 每孔加入250uL洗涤液洗板5次，**后一次请把板孔拍干；
10. 每孔加入100uL的TMB底物，室温下暗处孵育15分钟；
11. 每孔加入100uL终止液，然后酶标仪450nm读数；
五、结果判断
样品阻断率PI值=[1-（样品OD值÷阴性对照OD值）]*100
有效性：阳性对照的PI值必须大于55%，阴性对照OD值的平均值必须≥0.8
血清样品
阴性：样品的PI值小于30%，样品血清中抗体阴性
阳性：样品的PI值大于30%，样品血清中抗体阳性
牛奶样品
阴性：样品的PI值小于30%，样品中抗体阴性
阳性：样品的PI值大于30%，样品中抗体阳性
