美国Biostone塞尼卡谷病毒抗体检测试剂盒 480

美国Biostone塞尼卡谷病毒抗体检测试剂盒

AsurDxTM Senecavirus A (SVA) Antibody Test Kit

一、概述

试剂盒用于检测猪血清或者血浆中Senecavirus A A (SVA)抗体。试剂盒原理是基于间接ELISA方法，酶标板上已经包被SVA蛋白重组抗原，添加样品后，样品内的抗体能与板上包被抗原特异性结合形成抗原抗体复合物，并与后面加入的酶标二抗结合，二抗上的酶再催化底物显色，显色深度与样品中的抗体含量成正相关。

二、试剂盒规格及组分

试剂盒组分                                              10039-02              10039-05                储存温度

抗原包被板SVA antigen-Coated Plate           2*96                    5*96                      4°C

阳性对照（红盖） Positive Control               2管                      5管                        4°C

阴性对照（白盖） Negative Control             0.2mL                   0.5mL                    4°C

酶标二抗HRP-Conjugated Antibody Solution  24mL                   58mL                     4°C

10X稀释液10X Diluent Solution                    12mL                   28mL                     4°C

检测稀释液  Assay Diluent                          20mL                    50mL                     4°C

20X洗板液  20X Wash Solution                   56mL                     120mL                   4°C

TMB底物 TMB Substrate                             24mL                     58mL                    4°C

终止液 Stop Solution                                  24mL                     58mL                    4°C

备注：如果试剂盒超过一个月不使用建议阴阳性对照和酶标二抗-20°C储存。

三、试剂以及样品制备

1X稀释液：用9体积的蒸馏水稀释1体积的10X稀释液，得到1X稀释液。

1X洗板液：用19体积的蒸馏水稀释1体积的20X洗板液，得到1X洗板液。

样品血清/血浆预稀释：在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释10倍，例如将20uL的血清加入到180uL的1X稀释液中混匀，备用。

阳性对照：取出回温30分钟后，每管加入65ul 1X稀释液，振荡混匀后备用，不使用时放于-20°C储存，反复冻融应不多于3次。

四、实验操作

试剂                                     每孔用量

检测稀释液                            90 ul

样品/对照                              10 ul

酶标二抗                               100 ul

1X洗板液                               2 ml

底物                                      100 ul

终止液                                   100 ul

1. 实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出回复室温；

2. 设置好对照及样品在抗原包被板的位置，所有孔中加入90ul 检测稀释液；

3. 加入10ul的阳性对照到抗原包被板两个孔中；

4. 加入10ul的阴性对照到抗原包被板的另外两个孔中；（强烈建议将阴性和阳性对照血清分隔加入，例如左上方加阳性对照，右下方加阴性对照）

5. 其他孔加入10ul预稀释的血清样品（已经预稀释了1:10）.

6. 轻微振荡1分钟；

7. 封板，25°C孵育45分钟；（注意避免阳光直射和空气进入板中）

8. 弃去板中的液体；

9. 每孔加入250ul洗涤液洗板5次，**后一次请把板孔拍干；

10. 每孔加入100uL酶标二抗，封板，25°C暗处孵育30分钟；

11. 每孔加入250ul洗涤液洗板3次，**后一次请把板孔拍干；

12. 每孔加入100uL的TMB底物，室温下暗处孵育20分钟；

13. 每孔加入100uL终止液，然后酶标仪450nm读数；

五、结果判断

样品PP值=（样品OD值÷阳性对照OD值）*100

有效性：阴性对照的PP值必须小于40%，阳性对照OD值的平均值必须≥0.7

阴性：样品的PP值小于40%，样品血清中抗体阴性

阳性：样品的PP值大于40%，样品血清中抗体阳性