肉制品中动物源成分联合检测试剂盒
本制品是利用Real Time
PCR技术快速鉴定肉及肉制品种属的联合检测试剂盒。根据动物基因种间多态性的差异设计各物种特异性的引物,并将反应条件优化到同一体系,即可以在一个PCR
体系中同时对多个物种成分进行鉴定。本检测无需电泳,简单快速,灵敏度高、特异性强,并可以根据需要灵活组合鉴定的肉制品种类和检测样本的份数。
试剂盒成份
产品规格 40次/盒
储存条件 -20℃避光保存,有效期6个月。
DNA样品制备
使用专用的组织DNA提取试剂盒提取样本的DNA(自备,推荐使用OMEGA组织DNA提取试剂盒)。
实验操作步骤
1、实验准备:取出试剂于冰上解冻,解冻后简短离心。根据需检测的样本数取出8联管,每条8联管对应一个样本。
2、加样:按照8连管特异性布局每管各加入1ul对应的引物mix,10ul酶反应混合液和8ul的ddH2O,然后1-7孔依次加入1ul提取的待检DNA样本(约50ng左右),第8孔加入1ul阴性对照,加完样本DNA后,盖好管盖,简短离心,放入PCR仪中。
3、PCR反应条件:总反应时间约120分钟。
95℃ 5m in
95℃ 15s
60℃ 40s 35个循环
72℃ 45s
60℃
15s 溶解曲线
95℃ 15s
4、结果分析:反应结束后,检查扩增曲线和溶解曲线是否正常,是否需要调整基线。待调整好曲线后读取扩增曲线的CT值。 5、结果判定:阴性对照孔为阴性(无CT值),试验孔无CT值的直接判读为阴性;有扩增CT值的与内参孔扩增CT值进行比较,试验孔CT值减去内参孔CT值大于7的判读为阴性,小于等于7的判读为阳性;若阴性对照孔有CT值,且有明显的扩增曲线时结果无效,需重新做。
判读举例:由以下结果的CT值判断,样本1成分为猪源性成分,样本2成分为羊源性成分。
6、说明:本试剂盒在正常检测情况下不必设立阳性对照,各孔检测CT值只与内参孔进行对照即可,**后一孔为阴性对照。当检测结果异常,不易判定时可使用试剂盒中所带各阳性DNA进行验证。
注意事项
1. 初次使用前请仔细阅读说明书,并严格按照说明书进行操作。
2. 处理样本的器械、平皿、吸头、离心管等应高压灭菌且不能交叉使用;
3. DNA提取时应在通风橱内操作,且每次提取后都要清洗通风橱。
4. 使用专用的试剂盒提取样本DNA,保证DNA的质量。
5. 本试剂盒仅供定性筛查用。